犬瘟人会传染人吗？
犬瘟热病毒（ canine distemper virus，CDV ）属于痘病毒科（ poxvirus )，是主要感染犬、猫等动物的热性传染病原，可引起消化道、呼吸道和神经系统疾病症状，一旦被感染，发病死亡率高达 70%-80%，目前尚无疫苗可供使用[1]. 随着宠物数量的急剧增加以及宠物用品的广泛流通，研究人员发现病毒的宿主范围可随时间推移而扩大，有向人类传播的危险性[2]．因此研究该病毒的致病机制具有重要的现实意义。
我们此前已报道过狗瘟热病毒的结构蛋白NP 的功能分析结果 [3]，最近又进一步研究了其与细胞黏附相关蛋白ACE2 相互作用的可能机制。为了解狗窝病病毒的侵染机理提供了新的实验依据。
1、材料和方法 (1)毒株和细胞株 CDV 毒株 FIM593 由英国兽医研究所惠赠；HEK293T 和 Calu-3 细胞均由英国皇家兽医学院病原微生物系惠赠。 (2)试剂 TRIzol reagent(Invitrogen)， 核酸凝胶回收试剂盒(上海生工生物工程技术服务有限公司)，逆转录酶 M-MLV(Promega)，PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (TG) (TAKARA)。
(3)引物的设计与合成 根据 Genbank 中公布的 CDV NP 基因序列（ accession no.：DQ463284），利用 Oligo6 软件设计一对引物，用于 PCR 扩增目的片段及基因测序。引物序列为：S，5'-GACCCATTTGCGGCTCGAGA-3′；AS，5'-CACTCAAACCGCGTCAGACA-3′。
(4)RT-PCR 反应 按常规 RT-PCR 法进行，取 1×10 6 个细胞加 1 μL RT 混合液，总反应体系为 50 μL 。反应条件为：30℃、1 h；50℃、1 h；95℃、5 min。将扩增的片段切胶回收后进行 DNA sequencing（ABI PRISM 3730XL，Carlsberg Laboratory）。
(5)免疫荧光化学染色 取对数期生长的 HEK293T 细胞，刮下细胞培养皿中的细胞，以 PBS 洗涤两次，加入 PBS 配制的抗 ACE2 多克隆抗体（浓度为1：150），4℃ 孵育过夜后，加荧光二氨基苯甲酸（ DAB）标记的羊抗鼠 IgG 二抗（Jian Cheng Biotech），37℃ 孵育 30min，最后用 Hoechst33258 染色，在荧光显微镜（Olympus F-460，日本）下观察并拍照记录。